| Аннотация | В данной работе представлены результаты исследования образцов молока крупного рогатого скота при воспалении молочной железы методом ПЦР-РВ для выявления ДНК Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae и Streptococcus uberis. Аналитическая специфичность применяемого генодиагностического метода изучалась на основе образцов, включающих гомо- и гетерологичные культуральные и полевые штаммы. Данные микро-организмы относились к следующим классам: Bacilli, Bacilli (семейство Aerococcaceae), Actinobacteria Mollicutes, Большая часть видов принадлежала к классам Bacilli и Gammaproteobacteria. Перекрестной реакции в ходе эксперимента не наблюдалось, что свидетельствовало о 100 % специфичности. Методом лимитирующих разведений смешанного культурального образца (серия 10-кратных разведений геномной ДНК: 10-1-10-7) установлено предельное значение чувствительности эквивалентное 6х104 КОЕ/мл. Видовую структуру полевых микроорганизмов определяли на основе белковых спектров с помощью матричной лазерной десорбционной ионизационной времяпролетной масс-спектрометрии (технология MALDI-ToF MS). На основе полученных данных выявлено доминирование представителей рода Streptococcus (50%): S. dysgalactiae - 65,4%, S. agalactiae - 19,2%, S. uberis - 15,4%. Уровень диагностической чувствительности ПЦР метода установлен выше в 1,6 раза, чем при использовании серологического диагностикума на основе латексной коаглютинации. Диагностическая специфичность (100%) применяемого метода подтверждена отсутствием ложноположительных результатов ПЦР-РВ в группе здоровых животных. В процессе изучения параметров реакции амплификации установили, что k (угол наклона) в среднем составлял -3,50; R2 находился на уровне в среднем -0,994. Эффективность (Е) реакции в среднем составила 91,98 %. Коэффициент вариации (Cv) в среднем не превышал 10% в случае воспроизводимости и 5% для сходимости результатов измерений; R2=0,87 в случае линейности модели. Показано преимущество предлагаемого прямого метода детектирования ДНК стрептококков в полевом материале в значительном сокращении времени анализа и количества процедур (отсутствие этапа культивирования и выделения чистой культуры). |
|---|