| Аннотация | Применение метода витрификации в триацетатцеллюлозных полых волокнах (hollow fiber vitrification, HFV ) при работе с группами ооцитов и преимплантационных эмбрионов млекопитающих способствует стандартизации и упрощению процедур обработки в растворах витрификации/отогревания. Целью данной работы являлась оценка возможности применения метода HFV для криоконсервации дозревших in vitro ооцитов КРС и его оптимизации с целью повышения эффективности. Протокол HFV с относительно высокой суммарной концентрацией (15,0% v/v) проникающих криопротекторов в растворе эквилибрации, успешно использовавшийся для криоконсервации 7- и 8- дневных бластоцист крупного рогатого скота (КРС), позволил получить только низкие показатели выживания (38,5%, 10/26), дробления (40,0%, 4/10) и выхода бластоцист (0,0%, 0/10). На эффективность метода могло повлиять недостаточное насыщение ооплазмы криопротекторами в растворе эквилибрации в связи с низким соотношением площади поверхности ооцита КРС к его объему и низкой проницаемостью плазматической мембраны для криопротекторов и воды. Однако при увеличении времени инкубации ооцитов в растворе эквилибрации следовало учитывать возможные негативные последствия длительного воздействия на них высоких концентраций диметилсульфоксида (ДМСО) и этиленгликоля (ЭГ). Снижение суммарной концентрации проникающих криопротекторов до 5,0% с одновременным увеличением времени инкубации до 15 мин. в растворе эквилибрации позволило существенно повысить (хи-квадрат Пирсона, р<0,05) уровень выживания ооцитов (73,6%, 67/ 91) и получить одну бластоцисту на 7 сутки развития (1,5%, 1/67). Еще одним фактором, влияющим на эффективность метода HFV, могла быть недостаточная дегидратация ооцитов и/или окружающего их в просвете полого волокна раствора после обработки в растворе витрификации. Повышение концентрации непроникающего криопротектора сахарозы до 1,0 М в растворе витрификации в сочетание с вышеописанными модификациями позволило получить высокие показатели выживания(87,5%, 70/80), дробления (57,1%, 40/70) и выхода бластоцист (20,0%, 14/70). |
|---|